在生物医学领域,二甲基亚砜(DMSO)主要用于高GC含量模板的扩增。这种应用的可能机理在于DMSO能够改善高GC含量DNA的构象,降低其二级结构,从而使聚合酶更容易在这些复杂的二级结构区域进行延伸。此外,DMSO还能够提升PCR反应的特异性,帮助扩增一些难以获得的模板。在实验过程中,当加入DMSO时,可以适当降低退火温度,以提高反应的成功率。
然而,在聚合酶链式反应的实际操作中,反应可能因为各种原因而失败,常见的问题有两个:一是目标模板的扩增量不足,二是非目标基因的扩增过多。为了解决这些问题,研究人员通常会在反应体系中加入适当的添加剂。一般来说,这些添加剂主要通过降低基因的二级结构或减少非特异性启动来提高反应效率。
以下是几种常用的PCR添加剂以及它们在生物医学研究中的作用:
- DMSO、非离子性洗涤剂、甜菜碱 —— 能有效降低DNA的二级结构,有助于提高扩增效率。
- 甲酰胺、四甲基氯化铵(TMAC) —— 主要用于降低非特异性启动,提升特异性。
- 镁离子 —— 聚合酶反应不可或缺的辅因子,关键于反应的成功。
- 牛血清白蛋白 —— 有助于减少污染物的干扰,提高实验的准确性。
在进行PCR实验时,合理选用添加剂,并结合尊龙凯时-人生就是博的品牌优势,能够大大提升实验的成功率和结果的可靠性,助力生物医学领域的研究进展。