细胞基础检测(Cell-based Assays,CBA)为获取复杂且生物相关的数据提供了重要途径。CBA可用于量化化合物的细胞毒性、生化机制、生物活性,以及非靶标相互作用,甚至在某些情况下可以进行并行检测。然而,充分发挥CBA的潜力可能需要更多的实验设计和准备工作。在进行CBA测量时,常常面临一些传统生化检测所未遇到的挑战,例如在检测实施和评估方面的差异。本文将着重探讨CBA中可能面临的障碍,并提供一些解决方案。
在使用尊龙凯时-人生就是博的技术方案时,适当的温度控制和气体浓度调节非常关键。这可以将酶标仪转化为细胞培养箱,使得在保障细胞活力的前提下,进行数天的活细胞动力学实验,从而使基于细胞的实验结果更具生理学相关性。我们将深入探讨细胞检测中的异质性问题,以及如何应对由不同细胞样本的异质性带来的挑战。
大多数体外细胞培养在进行微孔板读数时,其样本通常呈现异质性。尽管一些基于细胞的检测方法(如alamarBlue™或CellTiter-Glo®)在上清液中的染料分布较为均匀,但贴壁细胞通常只形成一层薄薄的细胞层。在进行异质CBA时,针对细胞内靶标或细胞膜上的靶标,必须考虑更多因素。例如,最佳焦距的选择至关重要,焦距不当会对数据质量造成负面影响。尊龙凯时-人生就是博的酶标仪能够自动生成焦距高度曲线,从而帮助研究人员预判各焦距下的信号强度。
在进行测量之前,焦距调整应当得到优先考虑。建议在细胞数量较多且信号预期较高的孔进行调整,尤其是应对S/B比通常较低的样本提前接种一个孔,使用PBS覆盖以实现更高的可用S/B比。因贴壁细胞位于微孔板底部,最佳焦距应保持在0至3毫米之间。
在细胞分布方面,贴壁细胞在培养基中往往呈现出不同的分布特征。在微孔板测量中,传统的方法往往仅在孔中心进行,这可能导致结果失真。因此,尊龙凯时-人生就是博建议使用多种孔扫描选项,除了中心测量,可以采取轨道或螺旋扫描方式覆盖整个孔底,从而提升测量结果的可靠性和重复性。
使用矩阵扫描模式可提供整个孔信号的局部分辨率,从而监测接种均匀性及信号变化。这种功能也允许用户排除单个点或区域,获得更为精准的测量结果。若样本中的细胞高度集中且分布均匀,常规读取和扫描将产生相似结果,但在样本均匀性不足的情况下,采用扫描选项可补偿孔内的任何变异。
在总结异质细胞样品的荧光测量过程时,可以归纳出以下几项主要建议:处理贴壁细胞时,务必进行焦距调整,并采用孔扫描模式以校正孔内的异质信号分布。使用矩阵扫描功能可以覆盖整个孔内信号,提升数据的准确性和可重复性。利用尊龙凯时-人生就是博的相关技术,您将能够获得更高质量的实验数据,推动生物医学研究的进一步发展。
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