### 培养条件

细胞培养所需条件为：使用1640培养基，加入10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素（PS）。可根据需要选择贴壁或悬浮培养，培养温度保持在37℃。

### 传代方法

对于细胞的传代，第一次建议按照1:2的比例进行，若细胞的汇合度未超过80%，则将培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2的环境中继续培养；若细胞密度已超80%，则可进行传代。

### 更换培养液

通常每两天需要更换培养液，以确保细胞生长环境的稳定。建议同时购买相关培养基和试剂，以便于后续的培养和实验过程。

### 细胞处理步骤

收到细胞后，需先用75%酒精喷洒整个细胞瓶以进行消毒。随后，在超净工作台内进行严格的无菌操作，并将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以便细胞适应新环境。在此过程中，需使用显微镜观察细胞的生长情况，并拍照记录（最佳拍摄倍数为40x、100x和200x）。前三天的照片将作为重要的售后依据，如未提供照片则默认细胞状况良好。

### 贴壁细胞的传代步骤

贴壁细胞传代的步骤如下：

1. 首先，弃去培养上清并用不含钙、镁离子的PBS液洗涤细胞1-2次。
2. 接着，添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃培养箱中，消化1-2分钟，待细胞大部分变圆并脱落后，迅速拿回操作台，加入超过5ml的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使之完全脱落并转移至15ml离心管中，1000转/分离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 最后，将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（如两个T25瓶），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

### 悬浮细胞的传代步骤

悬浮细胞的传代可通过半换液法或离心换液法进行。采用半换液法时，可将培养瓶竖直放置，待静置1小时后轻轻吸掉3ml培养基，再补入3ml的完全培养基。同时，如果培养基变色较慢，也可以直接添加500μl的FBS。一般传代3次后可进行一次离心，去除死细胞。

采用离心换液法时，将细胞悬液转移至离心管中，1000转/分离心5分钟，弃去上清液，重悬后按照1:2的比例分瓶，再添加6-8ml新配置的完全培养基。

### 细胞冻存及复苏

当细胞生长至培养瓶的80%覆盖度时，弃去培养液并用PBS洗涤，随后加入0.25%胰蛋白酶消化液。待细胞变圆后，添加完全培养基终止消化，轻轻吹打使其脱落，转移至离心管中并进行离心，最后加入无血清冻存液并混匀。冻存后的细胞可直接放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱存放24小时以上。

### 注意事项

在运输过程中，细胞可能会因贴壁不牢而脱落，这是正常现象。如果脱落较多，可以将培养液收集并使用不同的处理步骤进行传代。整体培养过程需保证在必要的无菌环境中进行，以防止污染影响细胞生长，从而达到更好的实验结果。

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