在生物医疗研究领域，GPCR19激动剂（TGR5受体激动剂）的操作规程至关重要。以下是进行细胞实验的详细步骤：

步骤一：细胞接种

在96孔板中，每孔加入100μL的细胞悬液。通常在细胞增殖实验中，每孔添加2000个细胞（100微升），而在细胞毒性实验中，通常添加5000至10000个细胞。具体细胞数量需根据细胞大小和增殖速度等因素进行调整。将96孔板置于37℃，5% CO2的细胞培养箱中培养24小时。

步骤二：化合物处理

向每个孔中加入适当浓度的受试化合物，量可在0至10μL之间进行调整。

步骤三：孵育

将含有细胞和化合物的96孔板放入37℃、5% CO2、100%湿度的细胞培养箱中，进行适当时间的孵育。这一过程是确保细胞与化合物充分反应的重要环节。

步骤四：MTT染色

使用5×MTT稀释液，将其稀释至1×MTT溶液。每孔加入50μL的1×MTT溶液，并在37℃孵育4小时，以使MTT被细胞还原为甲臜。

步骤五：结果检测

吸出每个孔的上清液，向每孔中加入150μL的DMSO以确保甲臜溶解均匀，并使用平板摇床混合。

接下来，使用酶标仪在570nm波长下测定每孔的光密度（如无570nm滤光片，可选择560-600nm范围的滤光片进行检测）。

结果分析

a. 细胞存活率计算：将各测试孔的OD值减去背景OD值（即培养基加MTT，无细胞）或空白对照药物孔的OD值（培养基加不同稀释度的受试药物与MTT，无细胞）。对每个重复孔的OD值取平均，计算细胞存活率以T/C%表示，其中T为加药细胞的OD值，C为对照细胞的OD值。最终，细胞存活率%=（加药细胞OD/对照细胞OD）×100。

b. 计算药物浓度：求出T/C=50%时的药物浓度（IC50）及T/C=10%时的药物浓度（IC90）。

通过以上步骤，研究者可以系统地评估GPCR19激动剂的生物活性，为医药开发提供可靠的数据支持。与此同时，欢迎访问尊龙凯时-人生就是博，以获取更多生物医疗研究领域的最新资讯与动态。