RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640+10%FBS+1%双抗

传代方法：第一次建议1:2传代

传代情况：每2天更换培养基。备注：用无菌离心管收集培养基，以便进行过渡对比培养。若对比培养效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

在细胞状态良好时，灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后放入超净台进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，确保细胞状态稳定后再进行处理。

请显微镜观察细胞生长情况，并对不同倍数的细胞进行拍照保存（建议拍摄40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据。未提供照片默认细胞状态良好。

建议在传代后，用原瓶的完全培养基培养一瓶，另一瓶使用自配的完全培养基，便于进行对比培养，并在换液后松开瓶盖以保持通气。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，先收集培养液至离心管中，留下5ml完全培养基并放入37℃、5% CO2孵箱中继续培养。若细胞密度超过80%，则继续进行传代步骤，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加1-2ml消化液（0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA），在37℃培养箱中消化1-2分钟。显微镜下观察细胞状态，当细胞大部分变圆并脱落时，迅速轻敲培养瓶后添加5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞直至完全脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶（两个T25瓶），添加新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞变圆后加入5ml完全培养基终止消化，然后轻轻吹打细胞使其脱落，再转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，如需转入液氮罐，需在-80℃存放24小时以上后再转入液氮罐。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，直到无结晶为止，然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移到含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞可能在运输过程中因贴壁不牢而易发生脱落，此属正常现象。可以参考以下方法：将所有培养液收集至离心管并进行1000 RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养。随后加入1-2ml胰酶轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后添加5ml完全培养基终止消化，再离心并重悬。之后按1:2比例进行分瓶传代，并补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，将其放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题时的重发条件及判定标准：

1. 运输中问题：如细胞丢失、瓶身破损等。
2. 污染情况：需在收到产品48小时内提供实验结果，核实后重发。
3. 复苏后活性差：需提供真实细胞状态照片，重发。
4. 包括细胞状态不佳等其他情况，具体需依条件判定。

2）不予重发的情况包括但不限于：

1. 客户造成的污染。
2. 不当操作导致的细胞状态不良。
3. 出现的各种不合规情况等。

在使用我们的细胞培养产品时，请遵循本指南以确保细胞的活力和稳定性，体验尊龙凯时-人生就是博带来的优质服务！