在之前的干货分享中，我们探讨了Western Blot实验中蛋白浓度的四种测定方法。本篇文章则将聚焦于样本制备过程中的常见问题，并提供相应的解决方案。

问题一：蛋白浓度低

常见原因包括：

• 细胞或组织量不足；
• 样本与裂解液的比例不合适；
• 样本未充分裂解；
• 所选蛋白浓度测定方法不适用。

解决方案：

• 增加样本量；
• 根据样本量调整裂解液量，例如对于100万细胞或20mg组织，应加入100-200μL裂解液；
• 确保裂解时间充足，通常在低温下保持10-30分钟，组织样本可采用物理破碎，细胞样本则需要吹打或颠倒混匀；
• 选择适宜的蛋白浓度测定方法。

问题二：出现透明胶状物

这一问题通常是由基因组复合物释放引起的。

解决方案：

• 适当超声或使用1mL注射器反复抽吸，以破坏基因组DNA，从而减少粘稠感；
• 在加入Loading buffer后，延长煮沸时间，可以充分释放结合在基因组DNA上的蛋白，并使部分DNA断裂，从而消除粘稠感；
• 在裂解过程中，在裂解液中添加广谱核酸酶。

问题三：上清漂浮一层油脂

这种现象通常是由于样本富含脂肪导致的。

解决方案：

• 在裂解后，将样本置于低温静置，待油脂自然漂浮后吸除；
• 若吸取后仍不达标，可尝试使用二氧化硅进行吸附。

通过掌握上述常见问题及其解决方案，您在进行Western Blot实验的过程中将会更加得心应手。更多生物医疗的知识，请关注尊龙凯时-人生就是博，我们致力于为您提供专业的信息与资源支持。