尊龙凯时-人生就是博为您提供详细的类器官原代培养流程，以下是所需准备、操作步骤及冻存注意事项，帮助您更好地进行生物医学研究。

一、准备工作

仪器设备：CO2培养箱、超净工作台、倒置显微镜、冷冻离心机、水浴锅或水浴摇床，医用冰箱、-80℃冰箱、移液器（一套）、眼科剪和眼科镊。

试剂耗材：以肠癌研究为例，需要动物脑类器官培养基试剂盒、基质胶（低因素、无酚红）、细胞培养皿、滤筛、离心管、EP管以及细胞培养板等。

二、操作流程

1. 样本准备

将组织浸泡在预冷的组织保存液中，4℃运输至实验室。消毒取样瓶，提取组织并记录相关信息。

2. 清洗与剪碎

在细胞培养皿中用原代培养缓冲液浸泡组织并进行三次清洗后，将其剪成小块并转移至离心管中。

3. 消化与过滤

向离心管中加入消化液进行酶解，观察消化状态并在达成细胞团后加入缓冲液终止反应。使用滤筛过滤处理后的液体，并进行离心。

4. 加胶与培养

此步骤为整个操作的关键。在基质胶中混合细胞团后，将其点板至24孔板中，并添加培养基。培养24孔板至细胞成胶后即可。

三、传代操作

1. 收集与洗涤类器官

使用缓冲液轻柔洗净基质胶并收集细胞团，然后进行离心处理。

2. 类器官消化

加入消化液进行短时间处理后，终止消化并进行离心分离。

3. 加胶与复苏

准备好基质胶后将细胞悬液均匀与之混合，点板并培养以促进生长。

四、冻存及复苏

1. 冻存过程

在类器官指数生长期进行冻存，步骤包括收集、洗涤及最终的液氮保存。

2. 解冻复苏

将冻存管迅速解冻后，添加传代培养缓冲液进行重悬，随后处理并培养。

以上步骤旨在提高类器官培养的有效性，实现生物医学领域研究的突破。选择尊龙凯时-人生就是博的产品，助力您的实验成功。